产品货号：
YTB4362
中文名称：
兔IgG磁珠
英文名称：
BalbMag Rabbit IgG Magnetic Beads
产品规格：
1mL|5mL
发货周期：
1～3天
产品价格：
询价
本产品是由高品质的正常兔IgG与纳米级氨基磁珠共价偶联而成，通常用作免疫沉淀(IP)、免疫共沉淀(Co-IP)、染色质免疫沉淀(ChIP)等抗体相关实验时兔来源抗体磁珠的对照IgG磁珠。
本兔IgG磁珠中的兔IgG为正常的兔IgG，是一种未经任何标记的非特异性IgG。
本兔IgG磁珠作为对照磁珠时，可以排除IgG本身和特定目的蛋白或其它特定生物分子的非特异性结合。
本产品进行免疫沉淀的流程参考图1。
图1.百奥莱博的BalbMag Rabbit IgG Magnetic Beads (兔IgG磁珠)免疫沉淀流程图。
保存：4℃，有效期两年。长期不使用请置于-20℃保存。
相关搜索：兔IgG磁珠，兔IgG偶联磁珠，兔IgG免疫磁珠，BalbMag Rabbit IgG Magnetic Beads
本兔IgG磁珠中的兔IgG为正常的兔IgG，是一种未经任何标记的非特异性IgG。
本兔IgG磁珠作为对照磁珠时，可以排除IgG本身和特定目的蛋白或其它特定生物分子的非特异性结合。
本产品进行免疫沉淀的流程参考图1。
图1.百奥莱博的BalbMag Rabbit IgG Magnetic Beads (兔IgG磁珠)免疫沉淀流程图。
- 本产品非特异吸附低。
与国内外大多数的同类产品相比，本产品磁珠粒径小，不易产生非特异吸附。本产品每mL磁珠悬浊液含约10mg磁珠，含有不少于0.5mg兔IgG抗体，该磁珠基本不会识别任何抗原。使用量参考正常抗体免疫磁珠的用量。 - 本产品使用便捷。
本产品储存在特殊保护液中，不含甘油，可以通过磁性吸附实现快速高效的分离，无需离心操作。
| 磁珠浓度 | 10mg/mL |
| 磁珠粒径 | ~200nm |
| 磁珠磁性 | 超顺磁性 |
| 偶联蛋白 | 正常兔IgG |
| 蛋白分子量 | 约150kDa |
| 蛋白浓度 | ≥0.5mg兔IgG/mL磁珠 |
| 应用 | IP、Co-IP、蛋白纯化 |
| 组分 | 1mL | 5mL |
| BalbMag Rabbit IgG Magnetic Beads | 1mL | 5mL |
| 说明书 | 1份 | |
保存：4℃，有效期两年。长期不使用请置于-20℃保存。
- 本产品经测试，反复冻融3次以上，不影响使用效果。
- 本产品需维持pH为6～8，避免高速离心、干燥或冻存；请勿长时间将磁珠置于磁场中，否则可能会引起磁珠聚团。
- 本产品使用前要适当充分重悬，即颠倒若干次使磁珠混合均匀，混匀操作须轻柔，不宜剧烈涡旋震荡等，避免抗体变性等。
- 在免疫沉淀或纯化时，建议设置阳性和阴性对照组。
- 蛋白样品收集后宜尽快完成纯化工作，并应始终放置在4℃或冰浴，以减缓蛋白降解或变性。为有效抑制蛋白降解，可以在蛋白样品中添加适量的蛋白酶抑制剂混合物，例如百奥莱博的通用型蛋白酶抑制剂混合物(货号：YT964)、通用型蛋白酶和磷酸酶抑制剂混合物(质谱兼容，货号YTB4017)、蛋白酶抑制剂混合物(哺乳动物样品专用，货号YT966)、蛋白酶和磷酸酶抑制剂混合物(哺乳动物样品专用，货号YTB4018)等。
- 如果使用真空泵等仪器吸取上清液，须注意真空泵的吸液强度，以免吸力过大而吸取到聚集的磁珠。
- 酸性溶液洗脱时磁珠可能会发生聚集，属于正常现象，不影响磁珠的正常使用。0.1%的非离子型去垢剂(如Triton X-100、Tween-20或NP-40)可有效防止磁珠聚集，并且不会影响磁珠的抗体结合效率。
- 高浓度的DTT、巯基乙醇、盐酸胍等对本产品与标签蛋白的结合可能有一定影响，但WB及IP细胞裂解液(货号：YT038)、RIPA裂解液(货号：YT609、YT610、YT611)或NP-40裂解液(货号：YT613)等都完全适用。
- 样品的制备
- 选择合适的裂解液，用于制备细胞或组织的裂解液。优先推荐选择百奥莱博的WB及IP细胞裂解液(货号：YT038)用于细胞或组织样品的裂解。根据特定的实验目的，如有必要，也可以使用百奥莱博的RIPA裂解液(强，货号YT609)、RIPA裂解液(中，货号YT610)或RIPA裂解液(弱，货号YT611)用于样品的制备。如果使用自行配制的或其它公司生产的裂解液，需要确保裂解液的pH为6～8。
- 具体的细胞或组织样品裂解的制备步骤请参考裂解液的使用说明。制备好的裂解液上清宜置于冰上或4℃存放，随后即可用于免疫沉淀或免疫共沉淀、标签蛋白的纯化等操作。新鲜制备好的样品，建议尽量当天完成免疫沉淀等后续操作，但如果样品不能当天使用，也可以适当分装后-80℃冻存。
- 选择合适的裂解液，用于制备细胞或组织的裂解液。优先推荐选择百奥莱博的WB及IP细胞裂解液(货号：YT038)用于细胞或组织样品的裂解。根据特定的实验目的，如有必要，也可以使用百奥莱博的RIPA裂解液(强，货号YT609)、RIPA裂解液(中，货号YT610)或RIPA裂解液(弱，货号YT611)用于样品的制备。如果使用自行配制的或其它公司生产的裂解液，需要确保裂解液的pH为6～8。
- 兔IgG磁珠的准备
由于兔IgG磁珠储存在特殊保护液中，所以需要在加入样品前适当洗涤。 - 免疫沉淀(IP)
- 加入磁珠与孵育：
按照每500μL蛋白样品加入10μL或20μL磁珠悬浊液的比例加入兔IgG磁珠，置于侧摆摇床或旋转混合仪上，室温孵育2小时或4℃孵育过夜。
注：孵育过程中，如果磁珠发生聚团或呈片状属正常现象，不会影响实验结果。 - 磁分离：
孵育完毕后，置于磁力架上分离10秒，去除上清。
注：可保留部分上清液，用于检测免疫沉淀的效果。 - 洗涤：
加入500μL的1×TBS，用移液器轻轻吹打重悬兔IgG磁珠。置于磁力架上分离10秒，去除上清。重复洗涤三次。
注：也可以通过检测洗涤得到的洗涤液的OD280来判断是否洗涤完全，若OD280大于0.05，应适当增加洗涤次数。
- 加入磁珠与孵育：
- 洗脱
根据标签蛋白的特点及后续实验要求，可以选择如下3种方法之一进行洗脱。以下以兔源的Anti-Flag磁珠为例，兔Anti-Flag磁珠采用一种方式洗脱时，兔IgG磁珠作为阴性对照，需要使用相同的洗脱方式。- 3X Flag竞争洗脱法：本方法为非变性法，洗脱效率高，且洗脱后的蛋白保持原有的生物活性，便于后续分析检测。
① 3X Flag多肽洗脱液的配制：取适量3X Flag多肽(货号：YTB1290)溶解于1×TBS中，使其终浓度为150μg/ml，或稀释5mg/ml的3X Flag多肽溶液至150μg/ml。
② 每10～20μL原始磁珠体积，加入100μL 3X Flag多肽洗脱液(150μg/ml)，混匀后置于侧摆摇床或旋转混合仪上，室温摇晃孵育30～60分钟，或4℃孵育1～2小时。为了提高洗脱效率，可延长孵育时间或重复洗脱。
③ 孵育完毕后，置于磁力架上分离10秒，将上清转移到新的离心管中。上清即为洗脱的Flag标签蛋白。
④ 洗脱的Flag标签蛋白置于4℃待用，或者-20℃或-80℃长期保存。 - 酸性洗脱法：
本方法为非变性法，比较快速且高效。洗脱后的蛋白保持原有的生物活性，便于后续分析检测。
① 溶液的配制：酸性洗脱液(0.1M Glycine-HCl,pH3.0)，中和液(0.5M Tris-HCl,pH7.4,1.5M NaCl)。
② 每10～20μL原始磁珠体积，加入100μL酸性洗脱液，混匀后置于侧摆摇床或旋转混合仪上，室温孵育5分钟。
注：孵育时间不宜超过15分钟。
注：洗脱液的体积可以酌情适当调整，同时须注意后续的中和液体积也需要作相应调整。
③ 孵育完毕后，置于磁力架上分离10秒，将上清转移到新的离心管中，并立刻加入10μL中和液，适当混匀。
④ 为了获得最大的洗脱效率，可重复步骤②和③，并将相同样品合并。
⑤ 洗脱并中和的目的蛋白置于4℃待用，或者-20℃或-80℃长期保存。
注1：酸性洗脱法虽然高效，但仍可能低于竞争洗脱法或SDS-PAGE上样缓冲液洗脱法。
注2：由于目的蛋白的差异可能对酸性洗脱法的洗脱效率有一定的影响，如果对洗脱效率的要求比较高，可对酸性洗脱液的pH在2.5～3.1之间进行一定的调整，相应的中和液的pH值或量也要进行一定的调整，例如100μL酸性洗脱液(0.1M Glycine-HCl,pH2.8)和15μL中和液(1M Tris-HCl,pH8.5)。 - SDS-PAGE上样缓冲液洗脱法：
本方法为变性法，得到的蛋白样品适合SDS-PAGE电泳或WB检测。
① SDS-PAGE上样缓冲液的配制：可以直接使用百奥莱博的1×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(货号：YT050)，或使用百奥莱博的5×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(货号：YT620)或自行参考《分子克隆》等配制5X或2×的SDS-PAGE蛋白上样缓冲液，然后加入水配制成1×的SDS-PAGE蛋白上样缓冲液。通常SDS-PAGE蛋白上样缓冲液含有DTT等还原剂，其洗脱得到的蛋白样品中会含有Flag抗体的轻链和重链。
② 每10～20μL原始磁珠体积的磁珠，加入100μL 1×SDS-PAGE上样缓冲液，95℃加热5分钟。
③ 置于磁力架上分离10秒，取上清进行SDS-PAGE电泳或Western检测。
- 3X Flag竞争洗脱法：本方法为非变性法，洗脱效率高，且洗脱后的蛋白保持原有的生物活性，便于后续分析检测。
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